原代细胞永生化服务

1. 技术简介

细胞永生化（Cell immortalization）是指体外培养的细胞经过自发的或受外界因素的影响从增殖衰老危机中逃离，从而具有无限增殖能力的过程。正常组织来源的细胞在通常的体外培养条件下可分裂生长，但经过有限次数的传代后，就会停止增殖，发生衰老和死亡。利用基因转染等技术将外源性永生化基因导入目的细胞内，从而建立永生化细胞株，以达到使体外培养的细胞具有无限增殖能力且细胞间无差异的目的。对细胞永生化进行深入研究，不仅有利于我们了解细胞增殖与衰老的分子机制，而且为探寻肿瘤治疗及器官移植的研究奠定了坚实的基础。此外，由于永生化细胞具有可以多次传代的特性，可以利用各种细胞永生化的方法使那些传代困难、增殖缓慢、容易衰老的细胞获得永生，从而为研究人员提供更多的细胞资源。由于体外培养细胞自发性永生化率非常低，目前普遍采用基因转染技术将外源性永生化基因导入目的细胞内, 以增加永生化。

2. 实验方法

通过转入SV40基因，使p53,pRb功能失活，使细胞大量增殖，获得永生化。

5. 永生化细胞的验证

a传代次数的验证（大于原代细胞传代次数即为永生化成功）

b免疫荧光验证（永生化后标志性蛋白会丢失一些）

c STR鉴定（证明永生化过程中细胞没有存在交叉污染）