细胞培养中的黑胶虫简介
一、黑胶虫简介
在细胞培养的时候，有时会在40倍显微镜下看到小黑点在动，小黑点有时呈点状，有时呈小的片状，运动形式为在原地振动(类似布朗运动)，这种小黑点既不是细菌、霉菌，也不是支原体(用血平板培养，没有菌落出现)，目前业内人士称其为"黑胶虫"。黑胶虫究竟是一种生物还是非生物，本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫，也有人认为是细菌，或是真菌，也有人认为是血清中的蛋白的结晶。"黑胶虫"可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。"黑胶虫"与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候，细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。
二、黑胶虫疑惑
黑胶虫到底是否为生物?这个一直是业内人士的疑惑。黑胶虫一般是存在血清里的，而血清通常是经过0.1μm滤膜过滤的,所以血清里不可能存在细菌、霉菌及支原体等微生物。如果说黑胶虫不是生物，它会不断增多，达到一定数量时会与细胞竞争性生长，与细胞竞争培养基中的营养，从而使得细胞营养不足而死亡。
三、公认内容
不管对于黑胶虫的争论如何,但有几个是目前大家公认的:
① 与细胞竞争性生长，对细胞生长有不利影响。
② "黑胶虫"会增殖，增殖多时，视野下一大片都为"黑胶虫"。
③ "黑胶虫"与血清有关，与血清质量有很大关系。
四、目前对"黑胶虫"的定论:有2种解释:
第一，黑胶虫为生物：它是小于细菌的生物，直径小于0.1μm，大多国外血清中多见，可能是国外牛血清中含有的某种原虫。只要它是生物，那么在培养基中一定会对细胞有影响。
第二，黑胶虫不是生物：国内的血清中，通常灭活之后都会有絮状沉淀出现，而黑胶虫出现时，所使用的血清被反复冻融过多次。所以推测，所谓的"黑胶虫"其实就是血清中的某些蛋白成分的物质，经过灭活之后丧失活性，在培养基中，镜检见到的运动其实是这些物质在溶液中做“布朗运动”。随着细胞消耗培养基，这些物质越来越多，最后细胞所用的营养消耗完，细胞容易死亡。
五、黑胶虫特点
可以发现如下的特点:
(1) 与细胞共生，细胞长的好或密度大的话，小黑点就少，反之则 多;
(2) 对抗生素无效;
(3) 可能通过培养箱空气进行污染;
(4) 单用培养液及血清培养没发现问题。
(5) 换液冲洗后也无效
六、常用的处理方法
1.换好一点的血清。
2.如果是贴壁细胞的话，可用无菌的PBS洗几次，可一定程度上缓解。若是悬浮的话，就不太好处理拉，可以向其中少加一点滋养细胞。加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效!还有就是实验环境要注意好，保持细胞间整个环境的洁净度。
4.建议清理无菌室所有物品，重新灭菌，用KMnO4熏蒸，按首次使用无菌室做，细胞重新复苏。
5. 在换液前先加入生理盐水并轻轻拍打，冲洗干净后再加入培养液，坚持天天洗，传代时加生理盐水再离心一次，接种密度稍大一些，一段时间后，虫子就会大大减少，对细胞的生长也不会有大的影响。
6.有材料称minocycline具有一定的作用，可以和换液结合起来使用。
