培养专题-HEPG2细胞培养常见问题

 最近发现有不少同学的Hep G2养的并不是很顺利，对此来分享一下我们对此细胞培养的一些心得，希望可以帮到大家。

认识Hep G2

中文名称：人肝癌细胞

英文名称：HEP-G2; Hep G2; HEP G2; HepG2; HEPG2

细胞背景：该细胞来源于一名15岁的白人少年的肝癌组织。该细胞表达甲胎蛋白、白蛋白、α-2-巨球蛋白、α-1-抗胰蛋白酶、转铁蛋白、α-1-抗凝乳蛋白酶、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、纤溶酶原、补体C4、C3激活物、纤维蛋白原、α-1酸性糖蛋白、α-2-HS-糖蛋白、β-脂蛋白、视黄醇结合蛋白；表达胰岛素受体和胰岛素样生长因子IGFⅡ的受体；该细胞具有3-羟基-3-甲酰辅酶A还原酶和肝甘油三酯脂肪酶的活性。目前尚未证明该细胞中有HBV基因组。 

STR位点信息： Amelogenin：X，Y；CSF1PO：10，11；D13S317：9，13；D16S539：12，13；D18S51：13，14；D19S433：15.2；D21S11：29，31；D2S1338：19，20；D3S1358：15，16；D5S818：11，12；D7S820：10；D8S1179：15，16；FGA：22，25；TH01：9；TPOX：8，9；vWA：17；

Problematic cell line: Misidentified. Originally thought to be a hepatocellular carcinoma cell line but shown to be from an hepatoblastoma (PubMed=19751877).

ATCC参考图片：

培养注意事项

关于细胞特性：

      Hep G2细胞增殖时候呈岛状生长，细胞较容易聚团，且对培养条件要求较严格，特别是pH值和血清质量，否则可能影响细胞凝集数量，应使用高质量低内毒素，未灭火的胎牛血清，可以帮助圆形的细胞丛簇更好的贴壁及形成单层细胞。细胞内容易有空泡，特别是在融合时。

关于消化：

       Hep G2细胞之间连接比较紧密，会比较难消化。37度消化时间大约在3-4分钟，且会呈团块状脱落，可适当吹打将细胞尽可能分散后再进行终止消化。如果有较大的团块比较难分散开，也不用太大力将细胞吹开，避免给细胞带来较大的机械损伤。可在终止消化后，将细胞悬液转移到离心管，待较大的团块自然沉降，并吸出弃去。余下的细胞可正常的按照常规步骤离心接种即可。

关于培养基：

   MEM，10%FBS，NEAA，丙酮酸钠，Gluta-max；建议用优质胎牛血清。

关于冻存复苏：

   该细胞体积偏小，建议细胞冻存密度维持在1-2×10 ⁶/ml。冻存液配方：完全培养液95%，DMSO 5%%（冻存时候可以适当提高血清浓度，DMSO维持在5-10%的比例即可）。也可使用成品的冻存液，但最好在冻存细胞时候经过梯度降温。细胞复苏的存活率在70%左右。

关于运输：

   该细胞贴壁较牢，运输一般不会使细胞脱落。除非在温度偏低时候细胞会皱缩，进而可能会脱落。

总结：

       Hep G2细胞整体上属于比较容易培养的细胞，细胞增殖速度也偏快，一般1:6的传代比例，细胞可在3天左右时间融合度达到90%左右。使用正确的培养基，优质的血清，掌握细胞特性，Hep G2细胞的培养就不是什么难事了。

以上就是我对Hep G2的 一些培养心得，希望对大家有帮助。